除去发酵液中蛋白质的常用方法有哪些? 除去发酵液中杂蛋白质的常用方法

蛋白质沉淀方法
1.中性盐盐析法
⑴在一定的 pH值及温度条件下，改变盐的浓度（即离子强度）达到沉淀的目的，称为“Ks”分级盐析法。
（Ks盐析：固定pH, 温度，改变盐浓度）
⑵在一定的离子强度下，改变溶液的pH值及温度，达到沉淀的目的，称为“β”分级盐析法。
（β盐析：固定离子强度，改变pH及温度。）
2.等电点沉淀法
蛋白质等电点沉淀法是基于不同蛋白质离子具有不同等电点这一特性，依次改变溶液pH值的办法，将杂蛋白沉淀除去，最后获得目标产物。
3.有机溶剂沉淀法
许多能与水互溶的有机溶剂如乙醇、丙酮、甲醇和乙腈，常用于低盐浓度下沉淀蛋白质。
4.非离子型聚合物沉淀法
20世纪60年代非离子型聚合物开始用于分离血纤维蛋白原和免疫球蛋白，从此高相对分子质量非离子聚合物沉淀蛋白质的方法被广泛使用，如：聚乙二醇（PEG）、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）、葡聚糖等。
5.金属沉淀法
能与羧基、胺基等含氮化合物以及含氮杂环化合物强烈结合的金属离子，如：Mn2+、Fe2+、Co2+、Ni2+、Cu2+、Zn2+、Cd2+；
能与羧酸结合而不与含氮化合物结合的金属离子，如：Ca2+、Ba2+、Mg2+、Pb2+；
与巯基化合物强烈结合的金属离子，如：Hg2+、Ag+、Pb2+。
实际使用时，金属离子的浓度常为0.02 mol/L。
6.亲和沉淀
初始阶段：将一个目标蛋白质与键合在可溶性载体上的亲和配体络合成沉淀；
所得沉淀物用一生中适当的缓冲溶液进行洗涤，洗去可能存在的杂质；
用一种适当的试剂将目标蛋白质从配体中离解出来。
7.选择性变性沉淀法
（1）例如对于α-淀粉酶等热稳定性好的酶，可以通过加热进行热处理，使大多数杂蛋白受热变性沉淀而被除去。
（2）根据欲分离物质所含杂质的特性，通过改变pH值或加进某些金属离子等使杂蛋白变性沉淀而被除去。
8.反胶束萃取蛋白质

菌体细胞提取
固液分离是生物产品生产中的重要单元操作。培养基、发酵液、某些中间产品和半成品等都需进行固液分离。发酵液由于种类多、粘度大及成分复杂，其固液分离最为困难。
固液分离的方法很多，生物工业中常规的方法有分离筛、重力沉降、浮选分离、离心分离和过滤等，其中用于发酵液固液分离的方法主要是离心分离和过滤。

发酵工业中用于改善发酵液过滤性能的方法通常有：等电点、蛋白质变性、吸附、凝聚和絮凝、加入助滤剂、直接在发酵液中形成填充-凝固剂、酶解作用。
（1）过滤助剂
助滤剂是一种不可压缩的多孔微粒，它能使滤饼疏松，滤速增大。
过滤助剂可解决两个问题
①滤饼的可压缩性问题
②小粒子如菌丝碎片和细菌细胞，会渗入到转鼓真空过滤预覆盖层内部。使得预覆盖层的部分孔被堵塞，影响了渗透性。加入助滤剂可以解决这一问题
常用的过滤助剂有：硅藻土、珍珠岩、磨碎的木浆、淀粉
助滤剂的加入有两种方法：
①在滤布上预先铺一层助滤剂(1~2mm)，该方法，会使滤速降低，但滤液透明度
②直接加入发酵液中（助滤剂的用量，有一条经验规则可供参考，即助滤剂用量若等于悬浮液中固体含量时，滤速最快。）。
（2）填充-凝固剂
改善过滤性能较好的方法是加入一些反应剂，它们能相互作用，或和某些溶解性盐类发生反应生成不溶解的沉淀(CaSO4，AlPO4等)。生成的沉淀能防止菌丝体粘结，使菌丝具有块状结构，沉淀本身即可作为助滤剂，并且还能使胶状物和悬浮物凝固，如新生霉素发酵液中加入氯化钙和磷酸钠，生成的磷酸钙可作为填充-凝固剂。一方面作为助滤剂，另一方面还可使某些蛋白质凝固。又如环丝氨酸发酵液用氧化钙和磷酸处理，生成的磷酸钙沉淀，能使悬浮物凝固。多余的磷酸根离子，还能除去钙、镁离子。并且在发酵液中不会引入其它阳离子而影环环丝氨酸的离子交换吸附。正确选择反应剂和反应条件，能使过滤速度提高3~10倍。
（3）酶解作用
如发酵液中有不溶解的多糖存在则最好用酶将它转化为单糖，以提高过滤速度。例如万古霉素用淀粉作培养基，加入淀粉酶后，能使过滤速度加快。

15164256098：发酵液中的杂质蛋白是如何去除的,主要方法有哪些
徐皇答：发酵液中去除高价无机离子和杂质蛋白的手段主要是添加絮凝剂絮凝沉淀过滤 原浆预处理大致处理方法为: 凝聚-调温-调节PH-除杂 1)凝聚和絮凝 2)加热 3)调节悬浮液ph值 4)去除杂蛋白质 5)去除高价无机离子 6)加入助滤剂和反应剂。富一阳光为你解答，希望对你有帮助 ...

15164256098：发酵液分离的方法主要有哪些
徐皇答：② 变性法：其中最常用的是加热法，还有大幅度调节PH，加酒精、丙酮等有机溶剂或一些表面活性剂等方法；③ 吸附法：加入某些吸附剂吸附杂蛋白而将其除去。

15164256098：如何从发酵液中分离纯化蛋白质
徐皇答：粗提取——硫酸铵分级沉淀——透析脱盐——乙醇分级沉淀——离子交换层析

15164256098：发酵液预处理的方法
徐皇答：1. 过滤与离心：这是最基本的预处理方法，用于去除发酵液中的固体颗粒和细胞碎片。通过过滤或离心，可以有效分离液体和固体成分，得到相对澄清的发酵液。2. 调节pH值：发酵液的pH值对后续处理步骤和产物的稳定性有很大影响。根据目标产物的性质，可能需要使用酸或碱来调节pH值，以确保其在适当的范围内。

15164256098：发酵液预处理的方法有哪些?
徐皇答：1.离心 离心是一种常见的固液分离方法, 可以很好的除去菌体和蛋白质等大分子物质, 但由于需要较高的转速, 而且样品处理量较小, 导致设备投资和能耗很高, 不适合工业化生产。2.膜过滤 该法是利用具有一定选择透过性的过滤介质对目标物质进行分离, 常见的有微滤、超滤、纳滤, 可根据各物质分子量的不...

15164256098：将单细胞蛋白从发酵液中分离出来可采用的方法是
徐皇答：将单细胞蛋白从发酵液中分离出来可采用的方法是沉淀。单细胞蛋白又叫微生物菌体蛋白，它的生产过程比较简单：在培养液配制及灭菌完成以后，将它们和菌种投放到发酵罐中，控制好发酵条件，菌种就会迅速繁殖；发酵完毕，用离心、沉淀等方法收集菌体，最后经过干燥处理，就制成了单细胞蛋白成品。单细胞蛋白也...

15164256098：如何从发酵液中分离一个蛋白酶?如何测定其表达量和酶活?
徐皇答：首先，去除菌体和残余的发酵液，一般高速离心就可以，5000r/min离心1min.取上清。此部要根据蛋白质的特点来做。若果蛋白酶是在细胞内那么要先破碎细胞，如果该酶的分子量过大，那么要减小离心转速。其次，蛋白酶溶液中根据酶的性质，处理纯化或提取。常用方法是有机溶剂提取法，阴、阳离子交换柱层析发...

15164256098：发酵液过滤如何操作,有哪些方法?
徐皇答：发酵工业中用于改善发酵液过滤性能的方法通常有：等电点、蛋白质变性、吸附、凝聚和絮凝、加入助滤剂、直接在发酵液中形成填充-凝固剂、酶解作用。（1）过滤助剂 助滤剂是一种不可压缩的多孔微粒，它能使滤饼疏松，滤速增大。过滤助剂可解决两个问题 ①滤饼的可压缩性问题 ②小粒子如菌丝碎片和细菌...

15164256098：如何除去发酵液中的大分子物质?
徐皇答：大孔树脂过滤，或者像糖类、蛋白质分子可以采用沉淀法去除。

15164256098：生物样品中蛋白质的处理方法有哪些?
徐皇答：以上盐类复合物都具有很低的溶解度，极易沉淀析出。若沉淀为金属复合盐，可通以H2S使金属变成 硫化物而除去，若为有机酸盐或磷钨酸盐，则加入无机酸并用乙醚萃取，把有机酸和磷钨酸等移入乙醚中除去，或用离子交换法除去。值得注意的是此类方法常使蛋白质发生不可逆沉淀，应用时必须谨慎。三． 选择性...